1. RODNA
  2. FCEN
  3. FCEN - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. UBA
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Campo DC Valor Lengua/Idioma
dc.provenanceFacultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA-
dc.contributorCánepa, Eduardo Tomás-
dc.contributorVarone, Cecilia Laura-
dc.creatorVarone, Cecilia Laura-
dc.date.accessioned2018-05-04T21:57:51Z-
dc.date.accessioned2018-05-28T16:35:06Z-
dc.date.available2018-05-04T21:57:51Z-
dc.date.available2018-05-28T16:35:06Z-
dc.date.issued1998-
dc.identifier.urihttp://10.0.0.11:8080/jspui/handle/bnmm/73462-
dc.descriptionEl primer paso en la biosíntesis del hemo en las células animales es catalizado por la enzima mitocondrial δ-aminolevulinato sintetasa (ALA-S), que condensa glicina y succinil CoA para formar ácido 6-aminolevulínico y que, al menos en hígado, es la limitante de la velocidad. En hígado esta enzima constitutiva regula la producción de hemo necesario para sintetizar las proteínas citocromos P-450. Aunque en los tejidos animales el nivel de enzima es muy bajo, la transcripción del gen de ALA-S en hígado de animales de experimentación aumenta cuando se les administran compuestos porfirinogénicos como el fenobarbital. Diferentes mecanismos fueron propuestos por los que el hemo puede regular la expresión de ALA-S a nivel transcripcional reprimiendo la sintesis del RNA, a nivel postranscipcional disminuyendo la estabilidad del mensajero y a nivel postraduccional inhibiendo la entrada de la enzima a la mitocondria. En el presente trabajo examinamos el mecanismo ejercido por cAMP y glucosa sobre la expresión génica de ALA-S en hepatocitos de ratas normales y con diabetes experimental, y en cultivos de células HepG2. Se ha demostrado que el cAMP potencia la inducción mediada por fenobarbital, aumentando la cantidad del mRNA de ALA-S a través de la activación de la quinasa de proteínas dependiente de cAMP. El efecto inductor ejercido por el fenobarbital es mayor en hepatocitos diabéticos que en normales debido probablemente al nivel de cAMP elevado que presentan. Por otro lado, se ha demostrado que la glucosa inhibe la inducción de la expresión de ALA-S mediada por fenobarbital en hepatocitos normales pero no en diabéticos. Este efecto glucosa es revertido por la presencia de dibutiril CAMP,de activadores de la adenilil ciclasa o de un inhibidor de fosfodiesterasa. Se presentan evidencias que los efectos del cAMP y la glucosa son ejercidos a nivel transcripcional. La vida media del mRNA de ALA-S no se modifica en presencia de ellos. Mas aún, los efectos de cAMP y la glucosa se manifiestan en el análisis de tranfecciones transientes de células HepG2 con un vector que contenie la región promotora del gen ALA-S clonada en 5’ del gen de la cloramfenicol acetiltransferasa. En este tipo de experimentos hemos confirmado además que el efecto de cAMP requiere la activación de la proteina quinasa dependiente de cAMP ya que hemos obtenido resultados similares cotransfectando con la subunidad C de la PKA. Finalmente se demuestra que la activación de la PKC actúa negativamente sobre el mRNA de ALA-S, probablemente a nivel transcripcional, de acuerdo a las determinaciones por Northern, slot blot y análisis de transfecciones transientes de células HepG2. Asimismo se observa que el efecto del éster de forbol TPA anula el efecto inductor del cAMP. Es posible que ambos caminos de transducción de señales, que involucran la activación de PKA y PKC, estén interconectados en la regulación de la expresión génica de ALA-S.-
dc.descriptionThe first step of heme biosynthesis pathway in animal cells is catalyzed by the mitochrondrial enzyme δ-aminolevulinate synthase (ALA-S), wich condensates glycine and succinyl-CoA to form δ-aminolevulinic acid, and -at least in liver- is rate controlling. ln liver, this housekeeping enzyme regulates the supply of heme necessary to form respiratory cytochrome P-450 proteins. Although the enzyme level in animal tissues is usually very low, the transcriptional rate of ALA-S gene is greatly increased in experimental animal livers after the administration of a variety of porphyrinogenic effectors such as phenobarbital. Different mechanisms have been proposed to show that heme can regulate ALA-S gene expression at the transcriptional level by repressing mRNA biosynthesis, at the posttranscriptional level by diminishing ALA-S mRNA stability, and at the post-traductional level by inhibiting the enzyme entrance to the mitochondria. In the present work we examined the mechanisms underlying the effect of cAMP and glucose on ALA-S synthase gene expression both in isolated hepatocytes from normal and experimental diabetic rats, and in HepG2 cells. It was demonstrated that cAMP potentiates phenobarbital-mediated induction, increasing the amount of ALA-S mRNA by means of the activation of cAMP dependent protein kinase. The inducing effect exerted by the phenobarbital is greater in diabetic hepatocytes than in normal cells, due probably to the high level of endogenous cAMP in diabetic cells. One the other hand, it was shown that glucose inhibits phenobarbitalinduced ALA-S expression in normal hepatocytes, but not in diabetic ones. This glucose effect can be prevented adding dibutyril cAMP, adenylate cyclase activators, or a phosphodiesterase inhibitor. There are evidences that both cAMP and glucose effects would operate at the transcriptional level. ALA-S mRNA half life was not modified in their presence. Moreover cAMP and glucose effects were manifested in transfection analysis of HepG2 cells using ALA-S promoter region cloned 5’ upstream chloramphenicol acetyltransferase reporter gene. With this kind of experiments we were also able to confirm that the effect of cAMP requires the activation of cAMP dependent protein kinase, since it was possible to bypass this activation cotransfecting with PKA subunit C. Finally there are evidences that protein kinase C activation influences negatively ALA-S mRNA -probably at the transcriptional level-, according to Northern, slot blot and transient transfection analysis of HepG2 cells. We could also observe that the effect of phorbol ester TPA overcomes dibutyril cAMP induction. Thus, it is feasible that both signal transduction pathways involving PKA and PKC activation are interconnected in the regulation of ALA-S gene expression.-
dc.descriptionFil:Varone, Cecilia Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.-
dc.formatapplication/pdf-
dc.languagespa-
dc.publisherFacultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires-
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess-
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by/2.5/ar-
dc.source.urihttp://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_3046_Varone-
dc.subjectDELTA-AMINOLEVULINATE SYNTHASE-
dc.subjectGENE EXPRESSION-
dc.subjectHEPATOCTYTES-
dc.subjectCAMP-
dc.subjectPHENOBARBITAL-
dc.subjectHEME-
dc.subjectCAMP DEPENDANT PROTEIN KINASE-
dc.subjectGLUCOSE-
dc.subjectPHORBOL ESTERS-
dc.subjectPROTEIN KINASE C-
dc.subjectDELTA-AMINOLEVULINATO SINTETASA-
dc.subjectHEPATOCITOS-
dc.subjectFENOBARBITAL-
dc.subjectHEMO-
dc.subjectEXPRESION GENICA-
dc.subjectCAMP-
dc.subjectQUINASA DE PROTEINAS DEPENDIENTE DE CAMP-
dc.subjectGLUCOSA-
dc.subjectESTERES DE FORBOL-
dc.subjectQUINASA DE PROTEINAS C-
dc.titleRegulación de la expresión génica de la delta-aminolevulinato sintetasa por cAMP y glucosa : participación de las quinasas de proteínas A y C-
dc.titleCyclic AMP and glucose regulation of delta-aminolevulinate synthase gene expression. Rol of protein kinases A and C-
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis-
dc.typeinfo:ar-repo/semantics/tesis doctoral-
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion-
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