Registro completo de metadatos
| Campo DC | Valor | Lengua/Idioma |
|---|---|---|
| dc.provenance | Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA | - |
| dc.contributor | Calvo, Juan Carlos | - |
| dc.contributor | Sánchez, Melisa Celeste | - |
| dc.creator | Sánchez, Melisa Celeste | - |
| dc.date.accessioned | 2018-05-04T21:53:45Z | - |
| dc.date.accessioned | 2018-05-28T16:57:41Z | - |
| dc.date.available | 2018-05-04T21:53:45Z | - |
| dc.date.available | 2018-05-28T16:57:41Z | - |
| dc.date.issued | 2016-03-18 | - |
| dc.identifier.uri | http://10.0.0.11:8080/jspui/handle/bnmm/75356 | - |
| dc.description | A diferencia de las células somáticas, el espermatozoide posee su cromatina empaquetada principalmente por protaminas en lugar de histonas. Las cisteínas presentes en las protaminas forman puentes disulfuro intra e intercatenarios, lo que le proporciona al núcleo espermático gran estabilidad y resistencia para poder atravesar el tracto masculino, el femenino y llegar con su ADN intacto hasta el sitio de fecundación. Luego que el espermatozoide penetra el oocito es imprescindible que se produzca la descondensación de su cromatina para que se reemplacen las protaminas espermáticas por histonas oocitarias. La descondensación de la cromatina involucra dos eventos: se deben reducir los puentes disulfuro (tiorreducción) y removerse las protaminas. Las moléculas involucradas en estos procesos serían el glutatión reducido (GSH) y el heparán sulfato (HS) oocitarios. Cuando este proceso de condensación de la cromatina, que ocurre durante la espermatogénesis para mantener la integridad del espermatozoide, se ve afectado por diversas causas, puede resultar en fallas de la descondensación que se evidencian una vez que el oocito es penetrado. Por otro lado, es sabido que la exposición a tóxicos ambientales puede provocar efectos deletéreos sobre la calidad de los espermatozoides y la fertilidad masculina. Las técnicas de reproducción asistida han podido resolver problemas de motilidad, defectos espermáticos, concentración de gametas muy reducida en el fluido seminal (oligozoospermia) pero todavía no pueden solucionar los defectos de la descondensación del núcleo espermático dentro del oocito. Esto pone en evidencia la importancia del proceso de descondensación, que no puede ser reemplazado por las técnicas de reproducción asistida, y permite pensar en utilizarlo como un posible indicador del efecto de disruptores endocrinos, tanto in vivo como in vitro. Los objetivos de esta tesis fueron (1) avanzar en el estudio del mecanismo de la descondensación de la cromatina de espermatozoides, así como también en su (2) rol como posible bioindicador de efectos deletéreos causados por tóxicos ambientales o ingeridos, tales como el alcohol y el plaguicida endosulfán. En primer lugar, fue posible caracterizar el sistema de descondensación in vitro en el modelo de ratón al coincubar los espermatozoides con distintos glicosaminoglicanos y GSH, determinándose de esta manera las moléculas candidatas a ser posibles agentes descondensantes, las concentraciones y tiempos óptimos de incubación. Como consecuencia de esto, fue posible detectar un efecto sinérgico existente entre la heparina (utilizada como equivalente molecular del heparán sulfato) y el dermatán sulfato, los únicos glicosaminoglicanos estudiados con potencial capacidad descondensante. El efecto de estos dos glicosaminoglicanos también fue evaluado mediante la técnica de microscopia electrónica de transmisión, la cual puso en evidencia los cambios sufridos por los espermatozoides durante el proceso de descondensación. Una vez caracterizado el sistema, se logró evidenciar el aumento de la descondensación in vitro que ocurre cuando se incuban los espermatozoides con endosulfán o etanol, como también luego de la ingesta de etanol. Además, fue posible evaluar el efecto del plaguicida sobre la fragmentación del ADN, así como también si existe alguna correlación entre la misma y la descondensación de la cromatina. Los efectos del etanol observados in vitro fueron confirmados en experimentos in vivo, en los cuales se intoxicaron ratones macho para realizar experimentos de fecundación in vitro. Estos son los primeros resultados obtenidos descondensando in vitro en presencia de heparina y GSH, espermatozoides previamente incubados con endosulfán o etanol, que ponen de manifiesto que este ensayo podría utilizarse como centinela para evaluar posibles efectos de tóxicos ambientales o ingeridos. | - |
| dc.description | In contrast to somatic cells, sperm has its DNA packed mainly by protamines rather than histones. The presence of cystein in protamines allows for the formation of intra and interchain disulfide bonds, giving great stability and resistance to the sperm nucleus, enabling it to travel through the male and female reproductive tracts and reach the site of fertilization with its DNA intact. An essential step, once the sperm enters the oocyte, is the decondensation of its chromatin by replacing sperm protamines by oocyte histones. Chromatin decondensation involves two events: disulfide bridges should be reduced (thio-reduction) and the protamines removed. The molecules involved in these processes in vivo would be reduced Glutathione (GSH) and heparan sulfate (HS) present in the oocyte. When this process of chromatin condensation, which occurs during spermatogenesis to maintain the integrity of sperm, is affected by various causes, decondensation failure may result following oocyte penetration at fertilization. It is also well known that exposure to a toxic environment can cause deletereous effects on sperm quality and male fertility. Assisted reproduction techniques have been successful in solving problems of motility, various sperm defects, very low concentration of gametes in seminal fluid (oligozoospermy) but still cannot solve the shortcomings of the decondensation of the sperm nucleus within the oocyte. This highlights the importance of the decondensation process, which cannot be replaced by assisted reproduction techniques and led us to think of its possible use as a bioindicator of the effect of endocrine disruptors, both in vivo and in vitro. The objectives of this thesis were (1) to advance in the study of the mechanism of sperm chromatin decondensation as well as (2) its role as a possible bioindicator of environmental toxicity caused by toxic agents, such as alcohol and the pesticide endosulfán. First, it was possible to characterize the process of decondensation in vitro in the mouse by incubating sperm with different glycosaminoglycans and GSH, which led us to identify molecules which could behave as putative decondensing agents, concentrations and optimal incubation times. Subsequently, it was possible to detect a synergistic effect between heparin (as a substitute for heparan sulfate) and dermatan sulfate, the only glycosaminoglycans studied with potential to decondense the sperm nucleus in vitro. The effect of these two glycosaminoglycans was also evaluated on sperm morphology and ultrastructure through transmission electron microscopy, which allowed us to visualize the changes suffered by sperm during the decondensation process. Once the system was characterized, we were able to demonstrate the increase in in vitro decondensation that occurs when sperm are incubated with endosulfán or ethanol, as well as after ethanol ingestion. In addition, it was possible to assess the effect of this pesticide on DNA fragmentation as well as its possible correlation to chromatin decondensation. The alcohol effects observed in vitro were confirmed with in vivo experiments in which male mice were intoxicated and their sperm subsequently used to perform in vitro fertilization. These are, to our knowledge, the first results obtained decondensing in vitro in the presence of heparin and GSH, sperm previously incubated with endosulfán or ethanol, suggesting that the sperm decondensation assay could be used as sentinel to evaluate possible effects of environmental or ingested toxic agents. | - |
| dc.description | Fil:Sánchez, Melisa Celeste. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. | - |
| dc.format | application/pdf | - |
| dc.language | spa | - |
| dc.publisher | Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires | - |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | - |
| dc.rights | http://creativecommons.org/licenses/by/2.5/ar | - |
| dc.source.uri | http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_5924_Sanchez | - |
| dc.subject | SPERM CHROMATIN DECONDENSATION | - |
| dc.subject | HEPARAN SULFATE | - |
| dc.subject | HEPARIN | - |
| dc.subject | DERMATAN SULFATE | - |
| dc.subject | SPERMATOZOA | - |
| dc.subject | ENDOSULFAN | - |
| dc.subject | ETHANOL | - |
| dc.subject | DESCONDENSACION DE LA CROMATINA ESPERMATICA | - |
| dc.subject | HEPARAN SULFATO | - |
| dc.subject | HEPARINA | - |
| dc.subject | DERMATAN SULFATO | - |
| dc.subject | ESPERMATOZOIDE | - |
| dc.subject | ENDOSULFAN | - |
| dc.subject | ETANOL | - |
| dc.title | La descondensación de la cromatina de espermatozoides de mamíferos: estudio de su mecanismo molecular y su posible utilidad como bioindicador del efecto de disruptores endócrinos | - |
| dc.title | Decondensation of mammalian sperm chromatin: study of its molecular mechanism and its possible use as a biomarker of the effect of endocrine disruptors | - |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | - |
| dc.type | info:ar-repo/semantics/tesis doctoral | - |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion | - |
| Aparece en las colecciones: | FCEN - Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. UBA | |
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